[HICC.VN]

Trục Hepcidin / Ferroportin điều chỉnh sự tăng sinh của những tế bào cơ trơn trượt động mạch phổiTháng Hai 2021

*

Đối tượng

Tim mạchBệnh mạch máu

trừu tượng

những nghiên cứu đã được thực hiện giúp kiểm tra bất kỳ vai trò nào đối với trục hepcidin / ferroportin trong những phản ứng lại tăng sinh của những tế bào cơ trơn trượt động mạch phổi của con người (hPASMCs). Những phát hiện hoàn toàn mới lạ đã chứng minh sự hiện diện của ferroportin trong hPASMC. Điều trị Hepcidin xảy ra sự tăng sinh của những tế bào này rất cũng có thể bằng phương pháp liên kết với ferroportin làm cho nội hóa và giữ sắt của tế bào. Hàm lượng sắt trong tế bào tăng lên lúc điều trị hepcidin. Ổn định dấu hiệu và làm việc của ferroportin thông qua can thiệp với kháng thể đơn dòng trị liệu LY2928057 đảo ngược sự tăng sinh và tích lũy sắt của tế bào. Ngoài ra, điều trị IL-6 đã được tìm thấy giúp tăng cường sự tăng sinh và tích lũy sắt trong hPASMC; can thiệp với LY2928057 đã ngăn chặn phản ứng lại này. IL-6 cũng đã được tìm thấy giúp tăng phiên mã hepcidin và giải phóng từ hPASMC cho thấy phản ứng lại tự động tiềm tàng. Tích lũy sắt qua trung gian Hepcidin hoặc IL-6 góp phần tăng sinh trong hPASMC; ferroportin qua trung gian bài tiết sắt tế bào hạn chế sự tăng sinh. Huyết sắc tố cũng xảy ra sự tăng sinh của hPASMC; trong những phát hiện mới khác, CD163, thụ thể hemoglobin / haptoglobin, đã được tìm thấy trên những tế bào này và đáp ứng một phương tiện cho sự hấp thu sắt của tế bào thông qua hemoglobin. Il-6 cũng được tìm thấy giúp điều chỉnh CD163 trên những tế bào này. Những dữ liệu này góp phần hiểu rõ hơn về việc làm thế nào sự phá vỡ thăng bằng nội môi sắt cũng có thể xảy ra sự tái tạo mạch máu, chẳng hạn như trong tăng huyết áp động mạch phổi.

chúng ta đang xem: Hepcidin là gì

Giới thiệu

Hepcidin là một hormone peptide nhỏ (25 axit amin) nhận trách nhiệm chính trong việc máy lạnh thăng bằng nội môi sắt 1 . thứ nhất được xác định trong nước tiểu, hepcidin chủ yếu được sản xuất bởi tế bào gan 2 và lúc được đưa vào lưu thông cũng có thể tương tác với chất xuất khẩu sắt tế bào làm việc ferroportin, làm cho nó mắc phải nội tiết, do đó ngăn chặn sự thoát ra của sắt và khuyến khích giữ sắt của tế bào 3 . Hiện tại hepcidin và ferroportin đại diện cho những cơ quan quản lý duy nhất được biết đến về xuất khẩu sắt tế bào. Ferroportin được thể hiện chủ yếu trong những tế bào liên quan đến sự hấp thu sắt (từ chế độ ăn uống) và thăng bằng nội môi; ví dụ bao gồm tế bào ruột non, đại thực bào và tế bào gan.

dấu hiệu Hepcidin được điều chỉnh bởi nồng độ và cửa hàng sắt trong huyết tương; sự kiểm soát phiên mã này được tạo tình huống bởi thụ thể protein hình thái xương (BMPR) kết hợp với con đường truyền tín hiệu SMAD 4 . Điều quan trọng, nhiễm trùng và viêm cũng điều chỉnh quá trình tổng hợp hepcidin, một phản ứng lại đáng quan tâm nhất liên quan đến hoạt hóa IL-6 của con đường JAK / STAT 5 . Kết quả hạ đường huyết, được mô tả là thiếu máu do viêm, hỗ trợ hạn chế độc lực vi sinh vật (xem xét trong 6 ). Hậu quả liên quan đến việc tăng lưu trữ sắt cũng có thể bao gồm thiếu hồng cầu và rối loạn chức năng tế bào liên quan đến tích lũy sắt dư thừa 7, 8 . Về vấn đề này, sắt cũng là một yêu cầu thiết yếu cho sự tăng sinh tế bào; lúc có sẵn vượt quá, một trạng thái tăng sinh được khuyến khích 1, 7, 9 . Nhận thức hiện tại cho thấy rằng hầu hết những loại tế bào thể hiện rất ít hoặc không có ferroportin vì sắt chỉ được sử dụng cho những yêu cầu trao đổi chất và do đó không cần phải xuất tài nguyên này. Tuy nhiên, những nghiên cứu mới đang nổi lên đưa ra dấu hiệu và hoặc quy định của ferroportin và hepcidin liên quan đến sự lưu giữ sắt trong những tế bào thuộc những loại ung thư khác nhau 10, 11, 12 với việc giữ sắt có liên quan đến sự sống và tăng sinh của tế bào, do đó cho thấy vai trò của trục này trong bệnh tăng sinh.

Tăng huyết áp động mạch phổi (PAH) là một quá trình bệnh trong số đó thăng bằng nội môi sắt bất thường cũng đã được liên quan đến 13 và dư thừa hepcidin đã chứng minh 8 . Nó được đặc trưng bởi sự tăng sản khu vực của những thành phần cơ trơn trượt và tế bào nội mô của sức đề kháng, những tiểu động mạch phổi tiền mao mạch. Được biết đến như một căn bệnh hiếm gặp, PAH được phân loại thành vô căn, di truyền hoặc những dạng làm cho kết hợp với những tình trạng cụ thể, chẳng hạn như mô liên kết hoặc bệnh tim bẩm sinh 14 . Đột biến gen, và nổi trội là những đột biến liên quan đến BMPR II đã nhấn mạnh hầu hết những trường hợp di truyền và một tỷ lệ đáng kể những trường hợp lẻ tẻ của PAH 15 vô căn. Viêm cũng có thể là mối liên hệ phổ biến giữa tín hiệu BMP mắc phải rối loạn và mất sắt; quan trọng là IL-6 huyết tương được nuôi ở bệnh nhân mắc PAH 16 . Một cách hấp dẫn, tăng khả năng tự trị qua trung gian bởi hành động lysosomal (trong số đó BMPR-II và ferroportin đều mắc phải thoái hóa) đã được ghi nhận trong PAH 17, cho thấy mối liên hệ với việc xử lý sắt đã thay đổi.

Xem thêm: Bí Thư Đảng Ủy Là Gì – Tổ Chức Của Đảng Cộng Sản Việt Nam

Đối với nguồn sắt cho sự hấp thu của tế bào, điều này rất cũng có thể sẽ được đáp ứng thông qua những cơ chế qua trung gian thụ thể transferrin-1. Tuy nhiên, sự công nhận ngày càng tăng rằng hemoglobin tự do có liên quan đến PAH 18, không có kiểu hình bệnh tan máu cổ điển, cũng có thể gợi ý những con đường bổ sung giúp thu nhận sắt bởi những tế bào mạch máu phổi.

Do đó, nghiên cứu này đã được thực hiện giúp đánh giá liệu có bất kỳ vai trò nào đối với trục hepcidin / ferroportin trong những phản ứng lại tăng sinh của những tế bào cơ trơn trượt động mạch phổi. Mục tiêu của nghiên cứu là ba lần. thứ nhất, giúp mô tả lần thứ nhất sự hiện diện của protein xuất khẩu sắt, ferroportin trong những tế bào này. Thứ hai, giúp điều chỉnh dấu hiệu / làm việc của ferroportin trong những tế bào này giúp đánh giá mọi liên quan tiếp theo đối với những phản ứng lại tăng sinh. Thứ ba, giúp đánh giá bất kỳ vai trò nào đối với hemoglobin tự do trong sự tăng sinh và những cơ chế tiềm năng cho sự hấp thu của tế bào. Những nghiên cứu này cũng có thể đáp ứng chiếc nhìn sâu sắc về vai trò tiềm năng của thăng bằng nội môi sắt mắc phải phá vỡ trong việc tu sửa chữa mạch máu, như quan sát trong PAH.

những kết quả

Ferroportin được thể hiện bằng hPASMC và được máy lạnh bởi hepcidin

Ferroportin mRNA và dấu hiệu protein được thể hiện trong những tế bào cơ trơn trượt động mạch phổi của con người (hPASMCs) (Hình 1). dấu hiệu mRNA cơ bản ferroportin đã được phát hiện trong những hPASMC kiểm soát. Điều trị hPASMC bằng hepcidin (1 Phag / ml) trong 2, 5 giờ không có liên quan đáng kể lên tới độ dấu hiệu mRNA (Hình 1A). Phân tích Western blot lysates từ những hPASMC kiểm soát cho thấy một dải xấp xỉ 50 kD tương ứng với ferroportin lúc so sánh với những lysate ruột người tiêu chuẩn (Hình 1 B). Một ELISA có độ nhạy cao đã được sử dụng giúp định lượng nồng độ ferroportin. Nồng độ protein ferroportin cơ bản đã giảm rõ rệt 24 giờ sau lúc điều trị bằng hepcidin, cho thấy cơ chế kiểm soát máy lạnh sau dịch mã (Hình 1C). Hơn nữa, hóa mô miễn dịch theo sau bằng kính hiển vi đồng tiêu đã chứng minh sự định vị bề mặt tế bào cũng như sự phân bố nội bào của ferroportin trong những tế bào chưa được kích thích (Hình 1 D, tấm trên). Điều trị Hepcidin xảy ra sự thay đổi trong phân phối ferroportin khỏi bề mặt tế bào, hướng tới nội địa hóa có dấu lấm chấm, gợi ý về sự xuất hiện mụn nước (Hình 1 D, tấm dưới). Kích thước của những cơ quan có dấu này thay đổi từ 0, 51111M, tương ứng với kích thước của lysosome, cho thấy một vị trí tiềm năng cho sự thoái hóa của ferroportin nội bào. Liên quan đến những phát hiện này, trong những nghiên cứu ban đầu sử dụng những mẫu phổi từ những mô hình chuột của PAH (monocotaline và sugen hypoxia), mức độ nhuộm ferroportin khuếch tán rất thấp đã được nhìn thấy trong những tế bào cơ trơn trượt, ngoài ra còn có một vài tế bào nhuộm mạnh trong mẫu moncrotaline, nhiều khả năng là bạch cầu đơn nhân. Ngoài việc đưa ra một vài sự hiện diện của ferroportin trong những tế bào có liên quan này, không thể giải thích thêm những phát hiện này. Tuy nhiên, về vấn đề này đều có sự giảm rõ rệt về nhuộm ferroportin ở sugen hypoxia lách (kiểm soát dương tính) lúc so sánh với lách kiểm soát, gợi ý về phản ứng lại hepcidin toàn cầu trong mô hình PAH này, xem dữ liệu bổ sung.

Xem thêm: Chung Cư Htv Complex – Chung Cư Phú Thịnh Htv Complex

*

Ferroportin được thể hiện bằng hPASMC và được máy lạnh bởi hepcidin. những hPASMC kết hợp được ( A ) được xử lý giả hoặc được xử lý bằng 1 gang / mL hepcidin trong 2, 5 giờ và tổng số RNA được chiết xuất bằng bộ RNeasy, cDNA được tổng hợp bằng phương pháp sử dụng mồi oligo-dT và RT-PCR được thực hiện bằng phương pháp sử dụng màu xanh lá cây FBR mồi và-actin là gen giữ nhà. những giá trị được tiếp tục chuẩn hóa lúc những lần thay đổi đối với những ô không được điều khiển tại thời gian 0. N = 4 ( B ) được xử lý giả trong 24 giờ, những tế bào được ly giải và tổng số protein được chiết xuất, định lượng bằng xét nghiệm của Warren và 40 proteing protein được phân tách trên 10% SDS-PAGE và được chuyển vào màng nitrocellulose. Phương pháp làm mờ phương Tây đã được thực hiện bằng phương pháp sử dụng IgG chống thỏ làm IgG chính và dê chống chuột kết hợp với peroxidase củ cải ngựa làm kháng thể thứ cấp. Lysates đường ruột của con người (Abcam) đã được sử dụng như là kiểm soát tích cực. N = 3 ( C ) hoặc được xử lý giả hoặc được điều trị bằng 1 gang / mL hepcidin trong 24 giờ, những tế bào mắc phải ly giải và tổng số protein được chiết xuất. dấu hiệu Fpn đã được định lượng bằng phương pháp sử dụng bộ ELISA (BlueGene Biotech) và được chuẩn hóa thành tổng protein được ước tính bởi thuốc thử Bradford. N = 4 ( D ) Hình ảnh đồng nhất của hPASMC được trồng bằng (tấm trên cùng) hoặc (tấm dưới cùng) được xử lý bằng 1 gang / mL hepcidin trong 20 Hay22 h và nhuộm miễn dịch với kháng thể kháng Fpn của thỏ và chống thỏ Kháng thể thứ cấp IgG được gắn thẻ Alexa-568. những tế bào tiếp tục được chống lại với DAPI và hình ảnh được chụp bằng kính hiển vi đồng tiêu Leica LSM 510. Thanh tỷ lệ = 10 đỉnh; N = 5. Bài kiểm tra t của sinh viên đã được thực hiện; ** p 5 và do đó, thăng bằng nội môi sắt. Điều trị IL-6 của hPASMC đã chứng minh rõ ràng rằng cả mRNA và bài tiết protein của hepcidin đều tăng đáng kể theo quy định sau 2 giờ và 24 giờ (Hình 2A, B). Được xác định là thay đổi lần so với gen-actin, dấu hiệu hepcidin tăng 3, 3 lần với 10 ng / ml IL-6. Ngược lại, 48 giờ sau lúc điều trị IL-6, protein ferroportin đã giảm đáng kể 48% so với giá trị đối chứng (p

*

IL-6 tăng dấu hiệu hepcidin và ferroportin được điều chỉnh xuống trong hPASMC. những hPASMC kết hợp được xử lý giả hoặc xử lý bằng 10 ng / mL IL-6 ( A ) trong 2, 5 giờ và tổng RNA được chiết xuất bằng bộ RNeasy, cDNA được tổng hợp bằng phương pháp sử dụng mồi oligo-dT và RT-PCR được thực hiện bằng phương pháp sử dụng màu xanh lá cây của SYBR Hamp-1) mồi và-actin là gen giữ nhà. những giá trị được tiếp tục chuẩn hóa lúc những lần thay đổi đối với những ô không được điều khiển tại thời gian 0. N = 4 ( B ) trong 24 giờ, chất siêu lọc truyền thông được thu thập và bài tiết hepcidin được định lượng bằng bộ ELISA (Hệ thống R & D). N = 4 ( C ) trong 24 giờ tế bào mắc phải ly giải và tổng số protein được chiết xuất. dấu hiệu Ferroportin đã được định lượng bằng phương pháp sử dụng bộ ELISA (BlueGene Biotech) và được chuẩn hóa thành tổng protein ước tính bằng thuốc thử của Bradford. N = 4 ( D ) Hình ảnh đồng nhất của hPASMC được trồng bằng (bảng trên cùng) hoặc (bảng dưới) được xử lý với 10 ng / mL IL-6 trong 20 Hay22 h và nhuộm miễn dịch với kháng thể kháng Fpn của thỏ và chống dê Kháng thể thứ cấp IgG được gắn thẻ Alexa-568. những tế bào tiếp tục được chống lại với DAPI và hình ảnh được chụp bằng kính hiển vi đồng tiêu Leica LSM 510. Thanh tỷ lệ = 10 Pha, N = 5. Bài kiểm tra của sinh viên đã được thực hiện; ** p

*

Hepcidin và IL-6 kích thích tăng sinh hPASMCs mắc phải ức chế bởi LY2928057. hPASMC được mạ lên 96 tấm giếng (2500 tế bào / giếng). Sau lúc tuân thủ ban đầu, những tế bào đã mắc phải bỏ đói trong huyết thanh trong 20 phút 24 giờ trước lúc điều trị trước bằng một mình hoặc ( A ) 1 mậtg / mL hepcidin hoặc ( B ) 10 ng / mL IL-6 trong 24 giờ. Sau đó, những tế bào được tiếp xúc với 1 μg / mL LY2928057 hoặc môi trường một mình trong 1, 5 giờ sau đó tiếp tục thử thách lặp lại với hepcidin hoặc IL-6 ở nồng độ chỉ định (hoặc chỉ sử dụng phương tiện truyền thông) trong 24 giờ. BrdU đã được giới thiệu (ở nồng độ khuyến nghị của nhà sản xuất) trong 24 giờ nữa trước lúc thu hoạch những tấm. Sự tăng sinh được định lượng bằng bộ ELISA của BrdU bằng kháng thể chống BrdU-POD. Tất cả những phương pháp điều trị đã được thực hiện trong ba lần. Tất cả những bài đọc đã được chuẩn hóa giúp kiểm soát những tế bào không được điều trị. Dữ liệu hiển thị là ± SEM. N = 4. ANOVA theo sau là bài kiểm tra hậu hoc Bonferroni đã được thực hiện; * p 20 . Do đó, những thí nghiệm đã được thực hiện giúp xác định xem liệu điều trị hepcidin và / hoặc IL-6 có lợi cho việc giữ sắt trong hPASMC và thứ hai là nếu ổn định dấu hiệu ferroportin với LY2928057 cũng có thể hạn chế sự tích lũy đó. bằng phương pháp sử dụng xét nghiệm sắt màu, đo tổng lượng sắt (Fe 3+ và Fe 2+ ), không có sự gia tăng đáng kể về sắt trong những tế bào được điều trị bằng hepcidin hoặc IL-6 trong 24 giờ (Hình 4A, bảng bên cạnh trái). Tuy nhiên, việc ủ trước với LY2928057 làm cho giảm đáng kể nồng độ sắt trong tế bào: 5, 3 lần đối với hepcidin và gấp 4, 16 đối với IL-6 so với 2, 14 đối với những tế bào không được điều trị (Hình 4A, bảng bên cạnh phải). Điều thú vị là, thực hiện những phép đo tương tự trong 48 giờ cho thấy hàm lượng sắt trong tế bào tăng đáng kể: gấp 1, 88 lần và 2, 72 lần đối với những tế bào được điều trị bằng hepcidin và IL-6 (Hình 4B, bảng bên cạnh trái) mặc dù lượng sắt tế bào cũng có thể đo được giảm quá giới hạn phép đo xét nghiệm trong những tế bào được xử lý trước LY2928057 (Hình 4B, bảng bên cạnh phải). giúp hỗ trợ thêm, mức độ Protein máy lạnh sắt 2 (IREB2), chất thay thế cho mức độ sắt, đã giảm trong những tế bào được điều trị bằng hepcidin hoặc IL-6 và đáng kể đối với những tế bào được điều trị bằng hepcidin (Hình 4).

thường xuyên mục: Hỏi Đáp

Nguồn : Tổng hợp

[bvlq_danh_muc]

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *

This site uses cookies to offer you a better browsing experience. By browsing this website, you agree to our use of cookies.